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徕卡课堂 | LAS X功能冰山一角之FRET成像

发布日期:2021-09-23 发布人员: 浏览次数:3218

随着显微成像技术的发展,科研工作者对成像分辨率的要求越来越高,为此Leica在Zxin一代SP8共聚焦显微镜的基础上相继推出了超高分辨的STED和高分辨的Hyvolution;另一方面,简单的图像采集和分辨率的提升已经不能满足很多科研工作者的需求,他们需要更高级更强大的成像功能与图像处理功能。

LAS X软件作为Leica显微成像的搭载平台,不仅能够提供wan美的成像质量,而且整合了众多高级应用并具有强大的后期数据处理分析功能,包括图像2D、3D测量与分析功能、FRAP功能、FRET功能、Hyvolution高分辨功能、活细胞记录分析功能(live data mode)等,可根据用户不同的需求提供灵活的成像方案。

接下来小编将以FRET为例介绍其在生物医药领域中的应用。


FRET 简介

FRET(Förster resonance energy transfer,荧光共振能量转移)发生在供体荧光分子与受体荧光分子的距离足够近且供体的发射光谱与受体的吸收光谱相重叠时(10 nm以内)。当供体分子吸收一定频率的光子后被激发到更高的电子能态,在该电子回到基态前,通过共振实现能量向邻近受体分子转移。发生FRET后,供体的荧光强度比它单独存在时要低的多,而受体发射的荧光却大大增强,同时供体的荧光寿命也会因FRET的发生而缩短(FLIM-FRET应用)。

因此通过FRET可以分别从荧光强度及荧光寿命两个维度检测分子间的相互作用及分子的折叠与构象变化。


FRET 在生物医药领域中的应用

1)2016年发表在nature communication上的文章“AFRET biosensor reveals spatiotemporal activation and functions of aurora kinaseA in living cells”通过FRET技术构建了一种新型的生物敏感器(biosensor),通过该敏感器可以实现在活细胞内对Aurora kinase A蛋白时空调控及功能的研究。

首先,作者分别在体外和体内借助FLIM-FRET及免疫印迹技术证明生物敏感器GFP-AURKA-mCherry能够正确的反映Aurora kinase A的激活情况,且其发生FRET的条件即其构象的改变是由其Thr288发生磷酸化导致的。通过定位及功能回复实验,作者进一步证明该生物敏感器能正确行使Aurora kinaseA的功能。


具体详情,请点击下方链接:

http://mp.weixin.qq.com/s/zAkagGaxeJoD1_8_Y3herQ

 

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