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共聚焦显微镜的工作原理和分类

发布日期:2022-02-23 发布人员: 浏览次数:602

        共聚焦激光扫描显微镜是近十多年研制成的高光敏度、高分辨率的新型仪器。它以激光为光源,由共聚焦成像扫描系统、电子光学系统和微机图像分析系统组成。光束经聚焦后落在样品(组织厚片或细胞)不同深度的微小一点,并作移动扫描,通过电信号彩色显像,可使样品内任何一点的反射光形成的图像,都被准确地接收下来并产生信号,传递到彩色显示器上,再连接微机图像分析系统进行分析处理 。


        共聚焦系统的光源为离子激光器或HeNe激光器,光源发出的激光束通过照明针孔后成为点光源P。点光源P通过分束器进入高数值孔径显微物镜的成像系统成像后,在部分透明的被测样品内形成像点P。从像点P发出的散射光及反射光(波长为λ1)和其他荧光(波长λf>λ1),反方向经过物镜和分光镜后,入射到单点探测器。单点探测器由探测器和放置在探测器前的针孔组成,它可以减少探测器的有效面积。探测器一般使用的是光电倍增管或雪崩光电二极管,探测器接收到的电信号最 后由计算机进行处理。


①如果激光束聚焦点的直径小于针孔的直径,则P处的针孔可以去掉 


②有些材料能自发荧光,有些材料则需要用合适的染料上色


共聚焦显微镜分类


根据共聚焦点相对于标本的移动方式,目前共聚焦显微镜可分为3种。


其中最简单的是在透镜系统的光轴上固定住一个射限制点,控制其不发生术射,同时移动标本(标本扫描);


另一类是多点扫描型,弧形灯发出的光东经一个转动孔板精细定位,平行地进行扫描和检测,也就是转盘共聚焦显微镜;


最为常见的类型是单点扫描,即通过移动反射镜或使用声光偏转仪使激光通过光栅进行偏转。



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